聚合酶链反应(PCR)，即DNA的扩增，是分子生物学中已确立的过程。PCR技术在医学和传染病诊断、法医学和研究应用方面取得了长足的进步。关于治疗方案和临床疗效的决定通常是基于对患者细胞的DNA和RNA分析。确保适当的污染控制可以保证临床医生获得最好的可能结果。
聚合酶链反应污染最常见的原因:
- 不正确的实验室的建立和工作流程不当
- 运营商污染
- 样品分离失败
- 实验室设备灭菌不当
最佳PCR工作流程的实验室设置
建立适当的实验室环境和建立单向的工作流程是防止PCR污染的两种方法。为确保适当的设施控制，质量保证人员将根据实验室空间和可用设备的大小建立文件化的标准规程。人员应经过仔细的培训，并有权使用书面程序。
这种单向工作流程涉及以下5种最佳做法：
- 为每个PCR反应步骤建立单独的工作区域或房间
- NEVER先前处理的管返回到前述工作区域或房间
- 主混合料应在反应容器中准备和分离，并移到相邻和隔离的区域
- 其中主混合物制备DNA模板绝不能存在于区域
- 从完成扩增反应管不应该被存储在与未扩增的样品或试剂的未使用的
虽然大型实验室可以为每个PCR反应在设施内创建单独的房间，但小型实验室使用PCR罩或类似的死风箱(没有鼓风机的罩)来创建防止污染所需的分离。
避免PCR工作站的操作员污染
在任何实验室中，造成污染的最大因素是操作人员。为了缓解这种情况，操作员必须遵守既定的单向工作流程，并保持适当的实验室设备。遵循以下提示消除操作员污染：
- 工作人员必须始终佩戴手套，并定期更换
- 操作员必须尽职尽责地维护干净的工作表面
- 运营商必须遵守既定的工作流程单向协议
PCR罩、灭菌和操作员安全
PCR罩可以配备抗微生物UV灯，其在设定的时间间隔操作以消毒的工作环境。UV-C暴露可能是有害的，因此，尽管紫外线灯是从事工人应该是房间出来。如果这是不可能的，但是，实验室的工作人员必须始终这些灯在工作时佩戴适当的防护装备。重要的是，配备有UV灯罩被构造适当的耐紫外线的材料构成。
- PCR反应应在单独的PCR反应罩中进行
- 接着用70％乙醇冲洗整个罩工作表面，以及移液管，应与1:10或1:20稀释的漂白剂的被消毒
- 每个pcr反应罩应包含专用设备(移液管、离心机、塑料实验室设备)，不应将其移走或转移到另一个罩上
PCR罩中推荐的移液器
选择容积式移液器屏障提示，以防止结转从一个样品到下一个。这些移液器是理想的，因为与他们的一次性微量注射器提示的挥发性液体和高粘度样品的工作。容积式移液器不仅能提供更高的精确度，比空气排挤移液管他们也给卓越的样品保护。
结论
PCR反应中的污染可以通过遵循基本的实验室最佳做法和结合一些针对敏感PCR应用的专门技术来控制。理想情况下，用于研究遗传物质的实验室设备不应用于其他实验;即使有适当的清洁规程，仍然有交叉污染的机会。根据详细的、文件化的协议提高效率和准确性。
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照片宝石，
