Polymerase Chain Reaction (PCR), the amplification of DNA, is an established process used in molecular biology. PCR technology has made strides in medical and infectious disease diagnoses, forensics and research applications. Decisions about treatment options and clinical efficacy are often based on DNA and RNA analysis of patient cells. Ensuring proper contamination control guarantees that clinicians get the best possible results.
PCR污染的最常见原因：
- 错误的实验室设置和不正确的工作流程
- Operator contamination
- Sample separation failure
- 实验室设备灭菌不当
Laboratory Set-Up for Optimum PCR Workflow
创建适当的实验室环境并建立单向工作流是防止PCR污染的两种方法。为了确保适当的设施控制，质量保证人员将建立针对实验室空间和可用设备规模的有记录的标准化协议。人员应仔细培训，并提供书面程序的访问权限。
这个单向工作流程涉及以下5种最佳实践：
- 为每个PCR反应步骤建立单独的工作区域或房间
- 切勿将先前处理的管子返回到前面的工作区域或房间
- Master-mix should be prepared and aliquoted in the reaction vessel and moved to an adjacent and segregated area
- DNA template must NEVER be present in the area where the master-mix is prepared
- 切勿使用未放大样品或未使用的试剂存储的完全放大的反应管
虽然大型实验室的奢侈品是在设施中为每个PCR反应创建单独的房间，但小型实验室使用PCR引擎盖或类似的死空气盒（无气吹风机的引擎盖）来创建预防污染所需的分离。
避免使用PCR工作站的操作员污染
任何实验室中污染的最大贡献者是操作员。为了减轻这种情况，重要的是，操作员要观察已建立的单向工作流并维护适当的实验室装备。请按照以下技巧消除操作员污染：
- Personnel must always wear gloves, and change them regularly
- 操作员必须在保持干净的工作表面上练习尽职调查
- 操作员必须观察既定的单向工作流程协议
PCR引擎盖，灭菌和操作员安全
PCR引擎盖可以配备抗微生物紫外线灯，该灯以设定的间隔操作以对工作环境进行消毒。UV-C暴露可能是有害的，因此工人应在紫外线灯时离开房间。但是，如果不可能，在这些灯下工作时，实验室人员必须始终佩戴适当的防护装备。重要的是，配备紫外线灯的引擎盖是由适当的抗紫外线材料制成的。
- PCR反应应在单独的PCR反应引擎盖中进行
- The entire hood work surface, as well as pipettes, should be sterilized with a 1:10 or 1:20 dilution of bleach followed by a rinse with 70% ethanol
- Each PCR-reaction hood should contain dedicated pieces of equipment (pipettes, centrifuges, plastic labware) that should not be removed and/or transferred to another hood
PCR引擎盖中的推荐移液器
选择带有屏障尖端的正置放置移液器，以防止从一个样本到另一个样本的携带。这些移液器非常适合使用挥发性液体和高度粘性样品，因为它们具有一次性的微传输尖端。正位移不仅提供了更准确性，而且与空气置换移液器相比，它们还提供了优越的样品保护。
结论
PCR反应中的污染可以通过遵循基本实验室的最佳实践并纳入特定于敏感PCR应用的一些专业技术来控制。理想情况下，用于研究遗传物质的实验室设备不应用于其他实验。即使有适当的清洁协议，仍然有交叉污染的机会。通过以下详细的，有记录的协议来提高效率和准确性。
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照片由杰梅里奇,
